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你只知道elisa？
在生命科学领域多种情况下，及时、高效、经济地测定和量化样品中存在的抗原或抗体是至关重要的环节。
酶联免疫吸附实验(elisa)已被证明是非常宝贵的研究和诊断工具， 通过将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶（主要是hrp）标记的抗原抗体反应在固相表面，从而测量生物样品中的抗体或抗原。
elisa原理示意图
传统elisa避免了同位素的使用，消除了安全性的隐患，但外部条件对溶液颜色变化的影响巨大且od值有效的线性范围过低，elisa检测的灵敏度和动态范围大大受制于光吸收技术的缺陷。
1982年halonen等人在j clin microbiol杂志上发表了题为” time-resolved fluoroimmunoassay: a new test for rubella antibodies” 的文章，标志着免疫检测正式跨入荧光时代，这也是delfia技术的原型。
简单来说，delfia相比传统elisa实验有两个区别：
1. 检测抗体上的酶hrp换成镧系螯合物（(eu, sm, tb, dy）标记。
2. 检测方式为荧光检测。
delfia原理示意图
delfia中用到的镧系元素是一类特殊的具有荧光性质的元素，这对实验材料——酶标板提出了要求。
绝大多数elisa都选择透明酶标板作为作为载体和容器，但发光反应中发射出的光是各向同性的，光不仅会从垂直方向发散，还从水平方向发散出来，很容易的就会通过透明酶标板各个孔之间的间隙和孔壁。相邻孔之间相互影响，造成结果失误。
白色的酶标板可用于较弱的光检测，常用于一般的化学发光和底物显色（如双荧光素酶报告基因分析）。
黑色的酶标板因其自身会有光吸收，其信号要弱于白色的酶标板，一般用于检测较强的光，如荧光检测。
ø 高结合力
耐思黑色酶标板由非自荧光材料制成，表面经处理后，其蛋白结合能力大大增强，可达500ng igg/cm2，主要结合的蛋白分子量>10kd。
ø 背景荧光低，可消除非特异反应带来的问题。
黑色的酶标板因其自身会有光吸收，可排除一些较弱的背景干扰荧光。
ø 可拆式设计
白色酶标板框搭配黑色酶标板条的可拆式设计更便于操作。
当需要将板条拆下时，可从板条正面两端轻轻向上掰动，然后抠取下来，如上图所示。
若板条太紧难以掰动，可用手指抵住板条底部轻轻向上顶，然后如上图将板条抠取下来。
务必要戴好无尘手套，以免污染板条而影响板条的透光性。
不可从板条的一端强行掰取，容易造成板条断裂。
在装板条时，要注意方向，板条两端分别设计成方形和半圆形，半圆形那端必须装在有凸起台阶的卡槽内（箭头所在处），切勿装反。
将板条装入板框后，在两侧和中间部位都需要进行按压，压实后方可进行后续实验。
elisa·delfia
